上单和下路在非人学园中的定位和打法差异明显，主要体现在英雄选择、对线策略和团战作用上。上单通常选择体术或肉盾类英雄，比如红孩儿、阿蛟等，这类英雄需要有极强的生存能力和抗压能力。上单的核心任务是守住上路外塔，同时牵制敌方射手和辅助，为队友争取发育时间。下路则由远击英雄和支援英雄组成，比如太白、白灵等，远击英雄需要快速发育，支援英雄则负责保护和控制。上单更注重单人作战能力，下路则强调双人配合。
上单的对线策略以稳健为主，前期需要猥琐发育，避免被敌方射手和辅助消耗过多血量。上单英雄可以利用技能快速清兵，比如阿蛟的1技能和2技能组合能快速清理兵线，然后躲在塔下回血。下路的对线策略则更激进，远击英雄需要尽量压制敌方上单，同时支援英雄要提供视野和控制，防止敌方打野gank。上单需要时刻关注敌方打野动向，避免被包夹，而下路则要利用双人优势争取击杀或推塔。
上单英雄通常作为前排吸收伤害，或者切入敌方后排打乱阵型，比如琰萝的大招可以群体减速并回复生命值，为队友创造输出空间。下路的远击英雄则需要在后排安全输出，支援英雄要保护远击英雄不被刺客切入。上单的装备以防御为主，比如金属滑板、喵喵冲锋衣等，而下路的远击英雄则需要攻速和暴击装备，比如暴走鞋、羊教授喷射枪等。
上单英雄在推完兵线后可以游走中路或野区，配合打野抓人，但要注意及时回防，避免丢塔。下路的远击英雄通常以发育为主，支援英雄则可以灵活游走，帮助其他路建立优势。上单的游走更依赖传送技能或跳跃装置，而下路的支援英雄可以利用位移技能快速支援。上单的游走目的是带动节奏，而下路的游走则是为了扩大团队优势。
装备和应援的选择也体现了上单和下路的差异。上单英雄推荐带防御型应援，比如面包妹、头盔等，提升生存能力。下路的远击英雄则适合带输出型应援，比如风车男、拔子汪等，增加攻速和暴击率。上单的出装顺序优先考虑抗压，比如先出布甲或魔抗装备，而下路的远击英雄则需要尽快做出核心输出装，比如金轱辘棒或氪金弹头。
上单的核心是抗压和牵制，下路的核心是发育和输出，只有明确各自的职责，才能在比赛中发挥最大作用。
